法規(guī)是國家意志的體現(xiàn)，是行業(yè)行動的指南。但只有法規(guī)要求，沒有技術(shù)參考標(biāo)準(zhǔn)，大家該怎么做呢？

2020 年 5 月14 日，國家藥監(jiān)局發(fā)布了62 號文《關(guān)于開展化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價(jià)工作的公告》, 并同時(shí)發(fā)布了政策解讀， 宣告了注射劑一致性評價(jià)正式啟動。由此而來的將是數(shù)千億市場的大變局，以及技術(shù)和生產(chǎn)體系的大變革。同日，CDE關(guān)于發(fā)布62號文，包含《化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價(jià)技術(shù)要求》等共3個(gè)技術(shù)文件，其中關(guān)于藥品包裝方面的嚴(yán)苛規(guī)定，使得整個(gè)行業(yè)面臨包裝系統(tǒng)相容性、包裝密封完整性技術(shù)難題。關(guān)于注射劑包裝系統(tǒng)相容性參考法規(guī)及技術(shù)指導(dǎo)原則較多。但關(guān)于包裝密封完整性的法規(guī)及可供參考的技術(shù)指導(dǎo)資料較少國外：

>USP <1207>無菌產(chǎn)品包裝完整性評價(jià)

> USP <1207.1 > 產(chǎn)品生命周期中的包裝完整性測試一檢測方法選擇和驗(yàn)證

> USP <1207.2> 包裝完整性泄露測試技術(shù)

> USP <1207.3> 包裝密封質(zhì)量測試技術(shù)國內(nèi)：

剛剛定稿的《化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價(jià)技術(shù)要求》：穩(wěn)定性考察初期和末期進(jìn)行無菌檢查，其他時(shí)間點(diǎn)可采用容器密封性替代。容器的密封性可采用物理完整測試方法（例如壓力/ 真空衰減等）進(jìn)行檢測，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。

關(guān)于無菌制劑包裝密封完整性驗(yàn)證方法，目前國內(nèi)還沒有出臺相關(guān)確定性方法的測試標(biāo)準(zhǔn)。就CDE關(guān)于這方面的發(fā)補(bǔ)內(nèi)容、解析及大家關(guān)心的常見問題，做下整理匯總，以期日后能夠繞開這些坑。

第一類：

發(fā)補(bǔ)內(nèi)容：

1、請?zhí)峁┰敿?xì)全面的容器密封性驗(yàn)證資料；

2、請?zhí)峁┌拿芊庑则?yàn)證資料, 方法需經(jīng)適當(dāng)?shù)尿?yàn)證。

原因解析：這類發(fā)補(bǔ)是CDE比較早期的意見，可能資料提交的也早，導(dǎo)致這方面內(nèi)容的缺失，相信現(xiàn)在大家都不會有這種問題了。

第二類： 發(fā)補(bǔ)內(nèi)容：

1、請采用經(jīng)驗(yàn)證 ( 靈敏度需符合要求 ) 的方法對凍融循環(huán)樣品和穩(wěn)定性試驗(yàn)?zāi)┢跇悠愤M(jìn)行包材密封性檢查；

2、請參照 USP1207等技術(shù)要求對完整性檢查，方法進(jìn)行驗(yàn)證,

注意研究明確方法的靈敏度, 注意與微生物浸入法等密封性檢查方法

靈敏度進(jìn)行比較。

3、本品采用0.03%莧菜紅溶液抽真空法對滅菌后樣品進(jìn)行完整 性檢查，研究中請關(guān)注完整性檢查參數(shù)和條件，包括莧菜紅溶液濃度、真空度、時(shí)間等參數(shù)）對方法靈敏度的影響。

4、請參照USP1207提供包裝系統(tǒng)密封性驗(yàn)證資料, 如果方法的靈敏度無法達(dá)到USP1207規(guī)定的包裝產(chǎn)品較大允許泄露限度水平 , 建議采用微生物挑戰(zhàn)法進(jìn)行包裝容器密封性的測試并進(jìn)行驗(yàn)證, 關(guān)注微生物的種類、菌液濃度、浸入時(shí)間等。

原因解析：這類發(fā)補(bǔ)是沒有進(jìn)行方法靈敏度研究，雖然做了驗(yàn)證， 但所采用的驗(yàn)證方法屬于概率法，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中沒有考慮到諸多因素對概率法的影響，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可靠。有的案例用傳統(tǒng)方法比如色水法，并沒有驗(yàn)證方法能檢測的較小漏孔（即靈敏度），也沒有與實(shí)際無菌控制的微生物侵入法進(jìn)行靈敏度比較，無法說明擬采用的方法比現(xiàn)行的無菌控制方法檢出能力更高。

第三類：

發(fā)補(bǔ)內(nèi)容：

1、請進(jìn)一步研究驗(yàn)證包裝密封性：對驗(yàn)證所用的真空泄漏染色 法和微生物侵入法，需結(jié)合理論測算泄漏尺寸進(jìn)行實(shí)際陽性對照試驗(yàn)的確認(rèn)（應(yīng)注意陽性對照泄漏空隙尺寸選擇的合理性） ，以進(jìn)一步確認(rèn)檢測方法的靈敏度。必要時(shí)還需對兩種方法進(jìn)行對比，進(jìn)一步確認(rèn)泄漏風(fēng)險(xiǎn)與檢出能力的關(guān)系；

2、請?zhí)峁┤萜髅芊庑则?yàn)證資料，建議采用兩種方法對比驗(yàn)證，

驗(yàn)證過程中應(yīng)設(shè)定陽性對照組，同時(shí)關(guān)注驗(yàn)證方法的靈敏度；

3、密封性驗(yàn)證方法可采用確定性檢漏方法（如高壓放電檢漏法、真空衰減法）和概率性的檢漏方法（如微生物侵入法、色水法），同時(shí)設(shè)立陽性對照組進(jìn)行對比驗(yàn)證（包括方法的靈敏度），請采用至少兩種方法驗(yàn)證本品容器的密封性；

4、建議參照USP<1207、1207.1 、1207.2 、1207.3> 或注射劑相關(guān)行業(yè)指南繼續(xù)完善容器密封性驗(yàn)證研究資料，評估包裝容器對樣品的保護(hù)性和適應(yīng)性。驗(yàn)證方法可采用確定性檢漏方法（如：激光頂 空法、真空衰減法）和概率性檢漏方法（如：微生物侵入法、色水 法），同時(shí)設(shè)立陽性對照組進(jìn)行對比驗(yàn)證（包括方法的靈敏度）。若采用概率性檢漏方法驗(yàn)證，請明確驗(yàn)證樣本量的依據(jù)。

原因解析： 這類發(fā)補(bǔ)除了上面已提到的內(nèi)容，都有一個(gè)共性問題就是缺少陽性對照組。有的藥企在做密封性研究時(shí)， 只是用到設(shè)備驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)漏孔，并沒有在實(shí)物上制備陽性樣品，因此受到了藥審中心的挑戰(zhàn)。有的藥企雖然制備了陽性樣品，但是陽性樣品制備方法不合理，比如用針扎一下膠塞，然后拔掉，即完成了陽性樣品制備。

以上發(fā)補(bǔ)信息得出以下結(jié)論：

1 、 密 封 性 是 否 要 做 ？ 答案是肯定的，密封性必須要做。

2、密 封 性 怎 么 做？

應(yīng)當(dāng)驗(yàn)證所用包裝密封性方法的靈敏度，驗(yàn)證方式嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)；不管用什么方法申報(bào)， 應(yīng)當(dāng)和微生物侵入法關(guān)聯(lián)。如選用二種以上方法驗(yàn)證，必要時(shí)所有方法之間要相互關(guān)聯(lián)。

3、陽 性 樣 品 是 否 必 需？

答案是肯定的，必須用陽性樣品來驗(yàn)證檢測限（靈敏度），不能僅通過儀器自帶的微型流量計(jì)或者標(biāo)準(zhǔn)漏孔來確定檢測限。

激光打孔技術(shù)，是美國 FDA公認(rèn)的，USP1207引用的權(quán)威的陽性樣品制備技術(shù)。可采用激光打孔方式制備陽性樣品，相比其他制備方法的優(yōu)勢在于：漏孔幾何形狀和內(nèi)部氣體流動行為盡可能接近真實(shí)缺陷，激光打孔產(chǎn)生的泄漏通道是不規(guī)則的曲折通道，非常接近真實(shí)的缺陷。每一個(gè)漏孔都有配置漏孔校驗(yàn)證書，確保漏孔尺寸可追溯。當(dāng)前，激光打孔技術(shù)在硬質(zhì)玻璃或塑料材質(zhì)上可打的孔徑大約小至3um，如果更小的孔很容易被環(huán)境的灰塵雜質(zhì)堵塞。

不管進(jìn)行確定方法的開發(fā)驗(yàn)證還是概率性方法的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，陽性樣品的選擇都要謹(jǐn)慎，盡量選擇流量計(jì)量校準(zhǔn)方式的樣品。有研究表明采用光學(xué)檢測計(jì)量方式的樣品孔徑與泄漏率線性較差。

其他常見問題：

1、USP<1207 > 《無菌制劑包裝完整性評估》中規(guī)定硬質(zhì)容器最大

允許泄露限值可以采用0.1-0.3um。具體如何開展試驗(yàn)？

首先，包裝最大允許泄漏限值是依據(jù)產(chǎn)品的理化特性及微生物屬性要求確定，具有產(chǎn)品針對性。最大允許泄漏限值的設(shè)定可參照PDA Technical Report No. 27 Pharmaceutical Package Integrity (1998) 。開展完整性評估時(shí)，一定要先依據(jù)產(chǎn)品的理化特性及微生物屬性要求建立泄漏率標(biāo)準(zhǔn)（或最大允許泄漏限值），然后根據(jù)泄漏率標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行包裝完整性研究及驗(yàn)證，用驗(yàn)證結(jié)果證明產(chǎn)品在受控的狀態(tài)下生產(chǎn)，可以確保其在運(yùn)輸、儲藏及使用過程中的包裝完整性，也就是沒有超過最大允許泄漏限值的泄漏。如不建立最大允許泄漏限值，直接采用0.1-0.3μm也可以，該限值默認(rèn)可以保證無菌產(chǎn)品的理化 特性和無菌性。采用0.1-0.3μm作為最大允許泄漏限值，就要選擇靈敏度可以達(dá)到該限值的檢測方法，例如氦質(zhì)譜法，并進(jìn)行相應(yīng)的方法學(xué)驗(yàn)證。此時(shí)可以不進(jìn)行物理方法和微生物方法相關(guān)性研究，因此限值已知遠(yuǎn)較微生物方法靈敏，進(jìn)行合理性說明即可。目前國內(nèi)常見的確定性方法靈敏度都達(dá)不到MAll值，需要和微生物方法進(jìn)行關(guān)聯(lián)研究。

2、在開展物理方法和微生物方法的比對時(shí)，使用毛細(xì)管（內(nèi)徑10um,長度5mm)方式制作陽性樣品，在微生物方法中為陰性（未見有菌生長）。是否有相關(guān)的經(jīng)驗(yàn)可以借鑒？

使用毛細(xì)管（微型管）法制備陽性樣品，其毛細(xì)管的長度、管內(nèi) 是否含有氣體，都會對微生物的侵入產(chǎn)生較大的影響，并可能產(chǎn)生假陰性的結(jié)果；故陽性樣品的制備非常重要，一方面要盡量模仿產(chǎn)品實(shí)際泄漏的情況，一方面要避免產(chǎn)生假陰性結(jié)果的影響因素，如避免因毛細(xì)管過長（盡量接近包材本身的厚度）或避免管內(nèi)含有氣體。另外還可以在外部施加一定的壓力，以保證微生物的檢出概率。

3、在開展微生物法和色水法對比研究時(shí)，兩種方法在5μ m 和10μm孔徑下，陽性樣品的通過率均為100%，以上結(jié)果，是否需要進(jìn)一步開展2-3 μm的微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)？

傳統(tǒng)意義上無菌制劑的包裝完整性是指其能夠通過微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)驗(yàn)證。一般參照USP <1207.1> 和 USP <1207.2> 確定微生物挑戰(zhàn)法的檢出限指標(biāo)分級，進(jìn)而參照USP<1207.1>中“表 1- 包裝完整性測試方法泄漏檢測指標(biāo)”，對應(yīng)選擇合適的泄漏孔徑，孔徑的選擇無須迎合微生物的尺寸；然后制備陽性樣品和陰性樣品，進(jìn)行相應(yīng)的方法驗(yàn)證。如擬采用色水方法進(jìn)行替代則應(yīng)進(jìn)行二種方法的靈敏度比對，驗(yàn)證色水方法的檢測限是否低于微生物方法。

4、關(guān)于靈敏度的判斷標(biāo)準(zhǔn)：USP1207中舉例提到檢出率略低于100%，例如95%對應(yīng)的陽性孔徑為該方法的靈敏度， 國內(nèi)會如何要求？低于100%的檢出率為80%或者更低，能否被認(rèn)可？USP <1207> 標(biāo)稱的靈敏度孔徑需保證95%檢出率，如大于該孔徑，必須實(shí)現(xiàn)檢出率100%。從科學(xué)上講， 低于100% 的檢出率為80%或者更低作為檢測限，產(chǎn)生的結(jié)果難以作出判斷。鑒于目前我國尚未有相關(guān)的技術(shù)指導(dǎo)原則，USP <1207> 規(guī)定的靈敏度標(biāo)準(zhǔn)是可借鑒的參考；如國家局出臺相應(yīng)的技術(shù)指導(dǎo)原則，應(yīng)以我國的技術(shù)指導(dǎo)原則為準(zhǔn)。

5、生產(chǎn)過程中包裝完整性檢測，對抽檢的數(shù)量是否有相關(guān)的規(guī)定？在生產(chǎn)過程中包裝完整性檢測一般為初期、中期和末期，根據(jù)批量、包裝規(guī)格的不同，設(shè)定不同的抽樣標(biāo)準(zhǔn)。暫無統(tǒng)一的尺度要求。